Мультиплексная флуоресцентная визуализация вирусных нуклеиновых кислот и белков в инфицированных лимфоцитах человека

Начните с лимфоцитов человека, инфицированных HIV-1, на покровном стекле, закрепленном на предметном стекле.

Эти клетки были гибридизированы с зондами, которые флуоресцентно метят вирусную РНК и провирусную ДНК.

Инкубируйте клетки в блокирующем растворе для предотвращения неспецифического связывания антител.

Добавьте первичные антитела к капсидному белку HIV-1.

Инкубируйте образец, чтобы первичные антитела связались с белком капсида.

Промойте клетки буфером, чтобы удалить несвязавшиеся антитела.

Добавьте вторичные антитела с флуоресцентной меткой, которые связываются с первичными антителами.

Отмойте несвязанные антитела.

Добавьте специфический краситель для ДНК, чтобы окрасить ядра клеток, затем промойте образец для удаления избытка красителя.

Используйте мультиплексную флуоресцентную визуализацию для одновременного обнаружения вирусной ДНК, РНК, белков и ядер клеток хозяина, окрашенных в разные цвета.

Такая визуализация на уровне отдельных клеток позволяет изучать различные стадии жизненного цикла вируса посредством одновременного выявления вирусной ДНК, РНК и белков в инфицированных клетках.

Для иммуноокрашивания интересующих белков после последней промывки обработайте каждое покровное стек