Очистка интасом прототипа пенистого вируса методом эксклюзионной хроматографии

Начните с суспензии, содержащей преципитаты интасом прототипа пенистого вируса (PFV), мономерных интеграз, олигомеров ДНК и белковых агрегатов.

Интасомы PFV представляют собой тетрамеры вирусных интеграз, комплексованные с синтетическими олигомерами, имитирующими вирусную геномную ДНК.

Добавьте солевой раствор в суспензию и инкубируйте на льду. Соль снижает электростатическое взаимодействие между интасомами, что способствует растворению осадков.

Осторожно перемешивайте образец путем пипетирования через равные промежутки времени для стимуляции сольватизации интасомы.

Центрифугируйте для осаждения оставшегося осадка и соберите супернатант, содержащий растворимые интасомы.

Возьмите предварительно уравновешенную колонку для эксклюзионной хроматографии, заполненную сшитыми агарозными гранулами, и нанесите супернатант на колонку.

Из-за своего большого размера белковые агрегаты и интасомы проходят мимо пор гранул и элюируются раньше.

Более мелкие мономерные интегразы и олигомеры проникают в поры гранул и элюируются позже.

Соберите первые элюируемые фракции, содержащие интасомы, для последующего анализа.

Подготовьте два наконечника для пипеток с широким отверстием, срезав от 2 до 4 мм с конца након