Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:23 мин. • August 31st, 2026
Начните с приготовления раствора синтезированного стандарта вирусной РНК с последовательным разведением в культуральной среде.
Данные разведения служат эталонными стандартами для количественного определения вирусной РНК в образцах.
Теперь возьмите супернатант, содержащий вирус, из культуры зараженных вирусом клеток.
Эта культуральная среда содержит ингибитор, который связывается с РНК-деградирующими ферментами и предотвращает распад вирусной РНК.
Добавьте буфер для обработки, содержащий фермент протеиназа K.
Кратковременно центрифугируйте раствор для равномерного перемешивания.
Поместите ПЦР-планшет с образцами в термоциклер.
Сначала инкубируйте при умеренной температуре для активации протеиназы K.
Этот фермент расщепляет вирусные белки, инкапсулирующие геном, высвобождая вирусную РНК в раствор.
Затем инкубируйте при более высокой температуре для инактивации фермента и денатурации РНК.
В завершение храните обработанные образцы в условиях охлаждения до проведения количественного ПЦР-анализа в реальном времени.
Сначала смешайте 199 мкл обрабатывающего буфера с 1 мкл протеиназы K, свободной от нуклеаз. Используя среду для культивирования клеток, проведите серийное разведение подготовленной РНК 3
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео