Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:52 мин. • August 31st, 2026
Начните с культуры клеток рака печени человека, трансфицированных РНК вируса гепатита E (HEV) для получения вирусных частиц.
Некоторые частицы HEV приобретают эндосомальную мембрану хозяина и выходят из клетки, в то время как другие остаются внутри клетки в виде неимеющих оболочки HEV.
Для сбора внеклеточных частиц HEV соберите и отфильтруйте супернатант культуры, чтобы удалить клеточный дебрис.
Хранить при ультранизкой температуре для сохранения инфекционности.
Для сбора внутриклеточных частиц HEV промойте клетки буфером.
Добавьте трипсин-ЭДТА для отсоединения клеток, затем добавьте среду для остановки ферментативной активности.
Перенесите суспензию в пробирку и центрифугируйте.
Удалите супернатант, содержащий остаточный трипсин. Ресуспендируйте осадок и перенесите его в пробирку.
Заморозьте клетки в жидком азоте, а затем разморозьте их на льду.
Повторяйте циклы замораживания-оттаивания до лизиса клеток и высвобождения вирусов.
Центрифугируйте образец, соберите супернатант, содержащий вирусы, и храните при ультранизкой температуре.
На шестой день профильтруйте супернатант через сетку с размером пор 0.45 мкм для удаления клеточного дебриса и храните полученный внеклеточный вирус гепатита Е, в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео