Репрограммирование клеток крови человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки с помощью вируса Сендай

Возьмите культуру мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) человека.

Добавьте вирус Сендай, кодирующий транскрипционные факторы репрограммирования. Накройте и герметично закройте планшет.

Центрифугируйте для усиления контакта вируса с клетками, затем инкубируйте.

После слияния вируса вирусная РНК экспрессирует факторы транскрипции, которые активируют гены клеточной плюрипотентности и подавляют гены, специфичные для определенных линий, для инициации репрограммирования.

В течение этого времени часть трансдуцированных PBMC превращается в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSCs) и начинает экспрессировать адгезивные белки.

Перенесите их в лунку, покрытую матриксом, и центрифугируйте клетки. Замените супернатант на ростовую среду.

После инкубации иПСК прикрепляются к матриксу, в то время как трансдуцированные неадгезивные PBMC остаются во взвеси.

Перенесите суспензию в покрытую лунку и центрифугируйте. Добавьте среду в исходную лунку и инкубируйте обе.

Оставшиеся трансдуцированные PBMC начинают перепрограммирование, превращаются в iPSC и прикрепляются. Этот этап позволяет максимально увеличить выход перепрограммированных клеток.

Ежедневно заменяйте среду для поддержания ро