Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:48 мин. • August 31st, 2026
Возьмите культуру клеток млекопитающих в стационарной фазе с минимальной репликацией ДНК и соберите кондиционированную среду.
Добавьте вирус простого герпеса (HSV) и инкубируйте, периодически встряхивая, для обеспечения прикрепления вируса. Промойте для удаления несвязавшегося вируса и восстановите кондиционированную среду.
После инкубации вирус сливается с мембраной хозяина, высвобождая нуклеокапсид в цитоплазму.
Вирусная двухцепочечная ДНК (дцДНК) проникает в ядро, циклизуется и экспрессирует вирусные белки для репликации вирусной ДНК.
Вирусные и клеточные белки расплетают вирусную ДНК и синтезируют РНК-праймер. Затем комплекс вирусной ДНК-полимеразы связывается с праймером и удлиняет его для синтеза ДНК.
По мере протекания репликации добавьте в культуру аналог нуклеозида. Он проникает в клетки и преобразуется в трифосфатную форму.
Поскольку репликация ДНК хозяина минимальна, аналог преимущественно встраивается в реплицирующуюся вирусную ДНК, маркируя вирусные геномы.
Меченые вирусные геномы готовы к последующему протеомному анализу ассоциированных с ними белков.
Начните выполнение данной процедуры с культивирования клеток MRC-5, как описано в текстовом протоколе. Затем разведите HSV-1 в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео