Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 4:35 мин. • August 31st, 2026
Начните с клеток млекопитающих, инфицированных аденовирусом.
Проведите многократное замораживание и оттаивание для лизиса клеток и высвобождения вирионов.
Центрифугируйте лизат для осаждения клеточного дебриса. Соберите супернатант, содержащий вирусные частицы.
Нанесите вирусный супернатант на ступенчатый градиент хлорида цезия для разделения по плотности.
Ультрацентрифуга для обеспечения миграции вирусных частиц в соответствии с их плотностью плавучести.
Целые вирионы, содержащие полный аденовирусный геном, обладают большей плотностью за счет упакованной ДНК и оседают в нижнюю полосу, в то время как более легкие пустые капсиды и клеточный дебрис остаются в верхних слоях.
Удалите верхние слои. Соберите нижнюю полосу вирионов, содержащих геном.
Ресуспендируйте вирионы в хлориде цезия с однородной плотностью и повторно подвергните ультрацентрифугированию для более точного разделения и концентрирования полноценных частиц.
Удалите верхние слои и соберите нижнюю полосу.
Проведите диализ образца для удаления хлорида цезия.
Высокоочищенные аденовирусные векторы, содержащие геном, теперь готовы к дальнейшему использованию.
Для подготовки вирусного лизата к очистке в градиенте хлорида цезия подвергнит
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео