Вирусная доставка генов в сердце мыши для оценки влияния генов на функцию сердца

Начните с обезболивания мыши, помещенной в положение на спине, с предварительно выбритой кожей в области грудной клетки.

Продезинфицируйте выбритую кожу.

Используйте ультразвуковую визуализацию, чтобы осмотреть сердце и определить наружную стенку левого желудочка.

Возьмите микрошприц с рекомбинантным вирусом, кодирующим исследуемый ген, который, как предполагается, влияет на функцию сердца.

Под контролем ультразвукового исследования введите иглу в стенку желудочка.

Введите вирус в мышечный слой стенки.

Выполните вторую и третью инъекции, выбирая различные участки желудочка для достижения более широкой экспрессии гена.

Извлеките иглу и дайте мыши прийти в себя.

Вирус связывается с рецепторами на клетках мышц желудочков, инициируя рецептор-опосредованный эндоцитоз и транспорт вирусного генома в ядро.

Экспрессия вирусного генома приводит к синтезу кодируемого белка.

Теперь модель мыши готова к оценке влияния вирус-индуцированной экспрессии генов на функцию сердца.

Для начала стерилизуйте левую нижнюю область грудной клетки анестезированной мыши, попеременно обрабатывая ее йодсодержащим или хлоргексидинсодержащим скрабом и спиртом трижды круговыми движениями. Под контролем ультразвукового исследования введите иглу шприца, содержащего вирус, в грудную клетку животного.

Подведите кончик иглы к передней свободной стенке левого желудочка и медленно введите 10–15 µL вируса. Подтвердите успешное введение по усилению яркости сигнала вблизи кончика иглы на ультразвуковых изображениях. Извлеките иглу из сердца и введите ее в другие области левого желудочка для второй и третьей инъекции того же количества вируса.