Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:08 мин. • August 31st, 2026
Для начала используйте систему биореактора, содержащую децеллюляризированный каркас печени крысы, повторно заселенный клетками печени человека.
Скаффолд поддерживают в системе потока, в которой циркулирует среда для обеспечения поступления питательных веществ.
Наберите в шприц буфер, содержащий рекомбинантный вектор на основе адено-ассоциированного вируса.
Вектор несет самокомплементарную ДНК с трансгенной кассетой, кодирующей флуоресцентный репортер и РНК для сайленсинга генов.
Остановите поток среды и отсоедините трубку притока.
Введите вектор через основной кровеносный сосуд, питающий каркас.
Инкубируйте для обеспечения взаимодействия вектора с клетками.
Вектор проникает в клетки печени посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза.
Оказавшись внутри, вектор выходит из эндосомы и высвобождает свою самокомплементарную ДНК в ядро.
Самокомплементарная ДНК обеспечивает прямую экспрессию трансгена, что приводит к синтезу флуоресцентного белка и РНК для сайленсинга генов.
Постепенно возобновите поток среды, чтобы восстановить циркуляцию через скаффолд.
Трансдуцированная модель печени теперь готова к последующему анализу.
Теперь переходите к трансдукции модели печени. Сначала наберите в шприц 27 триллионов векторных геномов в 5 ml PBS. Допускается добавление фенолового красного в концентрации 5 µg/ml.
Затем отсоедините печень от контура подачи среды и введите векторы в систему. После введения инкубируйте систему в течение одного часа без перекачки среды. Затем постепенно увеличьте скорость потока, как было описано ранее.
В дальнейшем, в течение шести дней инкубации трансдуцированной печени, каждые два дня заменяйте 50 мл среды.