Рост вируса в клетках эпителия носа человека, культивируемых на границе раздела фаз «воздух-жидкость»

Начните с эпителиальных клеток носа человека, покрытых слизью, культивируемых на вставке transwell в многолуночном планшете.

Базальная сторона культуры контактирует со средой, в то время как апикальная поверхность открыта для воздуха, что имитирует интерфейс «воздух-жидкость» полости носа.

Промойте культуру буфером, чтобы удалить слой слизи.

Добавьте коронавирус, суспендированный в безсывороточной среде, в культуру.

Инкубируйте планшет, периодически осторожно покачивая его для обеспечения адсорбции вируса.

Удалите вирусный инокулят и промойте буфером, чтобы удалить несвязавшиеся вирусы.

Извлеките вкладыш и добавьте в лунку свежую среду.

Инкубируйте планшет для осуществления вирусной инфекции.

Коронавирус связывается с рецептором на поверхности клетки, проникает внутрь путем эндоцитоза и высвобождает свой геном в цитоплазму.

Вирусный геном реплицируется и синтезирует белки, которые затем собираются в новые вирионы.

Новые вирусные частицы высвобождаются апикально, распространяются, заражая соседние клетки, и амплифицируют вирусный рост.

Вырастите и дифференцируйте культуры назального интерфейса «воздух-жидкость» (ALI) в трансвеллах, имеющих базальную и апикальную камеры. Проведите экспансию дис