Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:44 мин. • August 31st, 2026
Начните со смеси плазмид, суспендированных в питательной среде.
Первая плазмида несет геном рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), кодирующий интересующий ген.
Вторая плазмида кодирует белки Rep и Cap.
Третья плазмида кодирует вспомогательные белки.
Добавьте агент для трансфекции к раствору плазмид. Тщательно перемешайте и инкубируйте.
Положительно заряженный трансфекционный агент связывается с отрицательно заряженной плазмидной ДНК, образуя комплексы.
Добавьте комплексы к монослою клеток млекопитающих. Инкубируйте.
Комплексы проникают в клетки посредством эндоцитоза.
Внутри клеток гены, закодированные в плазмидах, обеспечивают экспрессию вирусных белков.
Белок Rep обеспечивает репликацию вирусного генома, в то время как белки Cap формируют оболочки капсида.
Белок Rep совместно с хелперными белками упаковывает реплицированный вирусный геном в капсиды, формируя полноценные частицы AAV.
Рекомбинантные векторы AAV, несущие целевой ген, готовы к применению для доставки генов.
После создания конструктов rAAV9 и культивирования клеток HEK293 согласно текстовому протоколу, для трансфекции клеток на первый день смешайте 70 мкг плазмиды AAV Rep-Cap, 70 мкг плазмиды rAAV9 и 20 мкг вспомогат
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео