Бессмертие эндотелиальных клеток посредством ретровирусной трансдукции вирусных онкогенов

Возьмите среду, содержащую ретровирусные частицы, кодирующие вирусные онкогены и ген устойчивости к антибиотику.

Центрифугируйте среду для удаления клеточного дебриса.

Соберите супернатант, содержащий вирусные частицы, и нанесите его на культуру эндотелиальных клеток.

Инкубируйте для обеспечения проникновения вируса в клетки.

Вирусная РНК подвергается обратной транскрипции в ДНК, которая интегрируется в геном хозяина.

Ген устойчивости к антибиотику кодирует белок резистентности. Онкогены кодируют белки, которые связываются с белками-супрессорами опухолей, контролирующими деление клеток, и инактивируют их, тем самым увеличивая продолжительность жизни клеток.

Замените среду на свежую среду.

Проведите повторную инкубацию для обеспечения стабильной интеграции вирусной ДНК.

Удалите среду и промойте клетки.

Добавьте раствор для ферментативной диссоциации, чтобы отделить клетки.

Перенесите клеточную суспензию в пробирку, центрифугируйте и удалите супернатант.

Ресуспендируйте осадок и перенесите его в флакон.

Добавьте антибиотик в среду.

Выживают только клетки, экспрессирующие белок устойчивости к антибиотику, что позволяет селектировать клетки, иммортализованные белками вирусных онкогенов.

После инкуба