Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:52 мин. • September 30th, 2026
Начните с бактериальной культуры, содержащей интегрированный геном профага, который подавляется белком-репрессором фага, что поддерживает состояние покоя в лизогенной фазе.
Добавьте индуктор и инкубируйте при перемешивании для запуска клеточного стресса.
Клеточный стресс индуцирует автокаталитический расщепление белка-репрессора, что позволяет профагу перейти от лизогении к литическому циклу репликации.
ДНК профага вырезается из бактериального генома и последовательно транскрибирует ранние регуляторные гены, гены репликации ДНК среднего этапа, а также поздние структурные гены и гены лизиса.
Перенесите культуру в большой объем среды, чтобы разбавить индуктор, и инкубируйте для восстановления клеток.
Через определенные интервалы времени добавляйте стоп-раствор для прекращения транскрипции и сохранения профиля РНК в бактериальных клетках.
Центрифугируйте культуру и удалите супернатант. Ресуспендируйте клетки, перенесите суспензию в маленькую пробирку и центрифугируйте.
Удалите супернатант и быстро заморозьте осадок для сохранения целостности РНК.
Наконец, добавьте реагент для экстракции РНК и гомогенизируйте смесь для разрушения клеток. Образец готов к выделению РНК и последующему транскрипто
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео