Сбор аденоассоциированного вируса из трансфицированных клеток млекопитающих

Начните с многослойной клеточной камеры, содержащей трансфицированные клетки млекопитающих, продуцирующие векторы на основе аденоассоциированного вируса. Использование клеточной камеры способствует получению высокого выхода вирусного продукта.

Интенсивно встряхните камеру, чтобы отсоединить адгезивные клетки, высвобождая в среду клетки, содержащие вирус, и внеклеточные вирусные частицы.

Перенесите содержимое в пробирку и центрифугируйте для осаждения клеток, содержащих вирус.

Соберите супернатант, содержащий внеклеточный вирус, и перенесите его в бутыль для хранения.

Ресуспендируйте осадок в лизирующем буфере и инкубируйте.

Ферменты и детергенты в составе буфера вызывают лизис клеток, высвобождая интактные внутриклеточные вирусы в раствор.

Центрифугируйте лизат для осаждения клеточного дебриса. Соберите супернатант, содержащий вирус, и добавьте его в тот же флакон для хранения, в котором находится внеклеточный вирус.

Храните неочищенную вирусную суспензию при низкой температуре до дальнейшей очистки.

После инкубации интенсивно встряхните камеру для культивирования клеток, чтобы отделить клетки, до помутнения среды, и перелейте её в четыре центрифужные пробирки объемом 500 мл.

Осадите клетки