Трансдукция оплодотворенных эмбрионов крыс на основе лентивирусных векторов

Возьмите чашку для микроинъекций с каплей среды для культивирования эмбрионов в центре, покрытой минеральным маслом для предотвращения испарения.

Поместите чашку под инвертированный микроскоп.

Установите капилляр для микроинъекций и удерживающую пипетку в систему микроманипулятора под микроскопом.

Микроинъекционный капилляр заполняют суспензией лентивирусных векторов, несущих трансген.

Затем перенесите оплодотворенные эмбрионы крысы в среду.

Зафиксируйте эмбрион с помощью удерживающей пипетки, создав вакуум.

При большем увеличении введите капилляр для микроинъекций через внеклеточную гликопротеиновую оболочку эмбриона — zona pellucida — и введите суспензию лентивируса в перивителлиновое пространство.

Затем перенесите инъецированные эмбрионы в чашку для культивирования и инкубируйте.

Вирус проникает в эмбрион и высвобождает в цитоплазму свой геном, содержащий трансген.

Впоследствии он подвергается обратной транскрипции в ДНК и интегрируется в геном эмбриона, встраивая трансген.

Трансдуцированные эмбрионы теперь готовы к дальнейшей обработке.

Для микроинъекции лентивирусного вектора под zona pellucida эмбрионов на одноклеточной стадии используйте вытяжку для пипеток, чтобы подготовить микроинъе