Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:45 мин. • August 31st, 2026
Начните с суспензии бактериальных клеток, экспрессирующих вирусную интегразу с полигистидиновым тэгом.
Проведите соникацию суспензии для разрушения бактериальных мембран и высвобождения интегразы.
Перенесите лизат в пробирку для ультрацентрифугирования.
Центрифугируйте на высокой скорости для осаждения клеточного дебриса и соберите супернатант.
Затем возьмите хроматографическую колонку, заполненную смолой с ионами никеля, и уравновесьте ее буфером.
Нанесите осветленный лизат на колонку.
Белки, содержащие гистидины, слабо связываются с никелем, в то время как интеграза с полигистидиновым тегом связывается прочно.
Промойте колонку буфером для удаления несвязавшихся белков, затем добавьте элюирующий буфер с линейно возрастающей концентрацией имидазола.
Имидазол конкурирует с гистидином за связывание с никелем, что приводит к высвобождению интегразы.
Соберите фракции и перенесите аликвоты в пробирки с буфером для нанесения.
Нагрейте образцы для денатурации белков, затем нанесите их на полиакриламидный гель.
Проведите электрофорез и проанализируйте белковые полосы.
Определите фракции, содержащие чистую интегразу без посторонних белков, и объедините их для получения очищенной вирусной интегразы.
Начн
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео