Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:21 мин. • September 30th, 2026
Начните с очищенной фракции вирусного фермента интегразы, содержащей остаточную бактериальную нуклеазу в качестве контаминанта.
Нанесите образец на колонку с heparin-Sepharose, предварительно уравновешенную буфером для связывания с низкой концентрацией соли.
При прохождении смеси через колонку интеграза связывается с гепариновым лигандом сильнее, чем загрязняющая нуклеаза.
Затем постепенно увеличивайте концентрацию соли в буфере, пропускаемом через колонку.
При низких концентрациях соли сначала элюируются слабосвязанные нуклеазы, в то время как сильносвязанная интеграза элюируется позже, при более высоких концентрациях соли.
Соберите элюированные фракции по отдельности, чтобы отделить contaminating nuclease от интегразы.
Добавьте буфер для образцов SDS-PAGE в каждую фракцию и нагрейте для денатурации белков. Нанесите образцы на гель SDS-PAGE и проведите электрофоретическое разделение.
Проанализируйте окрашенный гель.
Определите фракции, содержащие отчетливую полосу интегразы без видимых contaminating proteins, что свидетельствует о кажущейся чистоте.
Для проведения фракционирования интегразы прототипа пенного вируса методом аффинной хроматографии на гепарине снизьте концентрацию хлорида нат
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео