Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:25 мин. • September 30th, 2026
Возьмите многолуночный планшет с эпителиальными клетками млекопитающих.
Приготовьте серийные разведения псевдовируса, содержащего спайковые белки коронавируса.
Замените среду в каждой лунке разведенной вирусной суспензией.
Инкубируйте, периодически осторожно покачивая планшет, чтобы обеспечить связывание вирусных спайк-белков с рецепторами клеток-хозяев.
Удалите среду. Добавьте среду, содержащую метилцеллюлозу, для создания полутвердого слоя, ограничивающего распространение вируса, и инкубируйте.
Вирус проникает в клетку и высвобождает свой РНК-геном.
РНК направляет синтез новых вирусных РНК и белков, которые собираются в вирусные частицы, выходящие из клетки.
Высвобожденные вирусы инфицируют соседние клетки, создавая прозрачную зону, называемую бляшкой.
Удалите слой покрытия и промойте клетки.
Добавьте краситель и инкубируйте планшет при перемешивании.
Промойте и высушите лунки.
Краситель окрашивает клетки, в то время как бляшки остаются прозрачными.
Подсчитайте количество видимых бляшек в каждой лунке для определения вирусной концентрации.
Для определения вирусного титра высейте клетки Vero E6 в 6-луночные планшеты с плотностью посева 6 × 10⁵ клеток на лунку и инкубируйте в течение ночи. На с
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео