Нейтрализация псевдовирусов, экспрессирующих спайковый белок коронавируса, с помощью сыворотки пациентов посредством антител

Возьмите многолуночный планшет, в тестовую лунку которого добавлена термоинактивированная сыворотка пациента, содержащая специфические антитела к коронавирусу. В качестве контроля используйте сыворотку здорового человека.

Добавьте к образцам сыворотки псевдовирусы, экспрессирующие spike-белки коронавируса и несущие РНК, кодирующую зеленый флуоресцентный белок, и инкубируйте.

В тестовой лунке антитела связываются со спайковыми белками и нейтрализуют псевдовирусы, в то время как в контрольной лунке неспецифические антитела не связываются со спайковыми белками, оставляя псевдовирусы свободными.

Добавьте смесь к монослоям эпителиальных клеток. Инкубируйте для адсорбции вируса.

Добавьте в каждую лунку полутвердую среду для наложения, чтобы ограничить диффузию вируса. Инкубируйте.

В контроле несвязанные псевдовирусы связываются с клеточными рецепторами, проникают в клетки, высвобождают РНК и экспрессируют GFP, образуя флуоресцентные очаги инфекции.

В тестовой лунке нейтрализованные антителами псевдовирусы не могут проникнуть в клетки, что предотвращает образование очагов инфекции.

С помощью флуоресцентного имиджера подсчитайте количество флуоресцентных очагов инфекции.

Отсутствие фокусов инфекци