Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:31 мин. • September 30th, 2026
Начните с культуры клеток млекопитающих в среде с низким содержанием сыворотки.
Добавьте ДНК-липидный комплекс к клеткам.
Комплекс содержит лентивирусные упаковочные плазмиды и экспрессионную плазмиду, кодирующую интересующий ген.
Инкубируйте для обеспечения проникновения комплекса в клетки.
Замените среду, чтобы удалить остатки реагента для трансфекции, и инкубируйте.
Внутри клетки плазмидные ДНК проникают в ядро и направляют синтез вирусной РНК, несущей целевой ген, а также вирусных компонентов, включая белки капсида и оболочки, обратную транскриптазу и интегразу.
Эти компоненты собираются в рекомбинантные лентивирусные частицы, которые почкуются из мембраны клетки-хозяина.
Соберите среду, содержащую высвобожденные вирусные частицы.
Центрифугируйте пробу для осаждения клеточного дебриса и профильтруйте вирусный супернатант для удаления остаточных загрязнений.
Центрифугируйте на высокой скорости для осаждения целых вирусных частиц.
Удалите супернатант и ресуспендируйте вирусный осадок в небольшом объеме свежей среды.
Храните концентрированный рекомбинантный лентивирус при низкой температуре для последующего использования в исследованиях.
Для начала получения концентрированного лентивируса выс
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео