Оценка иммуномодулирующей активности вирусно-кодируемого биспецифического активатора Т-клеток

Начните с тестовой лунки, содержащей генетически модифицированные опухолевые клетки, экспрессирующие целевой антиген, и контрольной лунки с опухолевыми клетками, не экспрессирующими данный антиген.

Возьмите биспецифический активатор Т-клеток (BTE), кодируемый вирусным трансгеном, имеющий два сайта связывания: один для целевого антигена и другой для Т-клеточного специфического рецептора.

Добавьте BTE и T-клетки в лунки и инкубируйте.

В тестовом образце BTE сшивает опухолевую клетку и Т-клетку, активируя Т-клетку для высвобождения цитолитических гранул.

Это вызывает лизис опухолевой клетки с высвобождением внутриклеточного фермента.

В контроле BTE связывается только с Т-клеткой, предотвращая лизис опухолевых клеток.

Центрифугируйте и соберите супернатант.

Добавьте субстрат и инкубируйте.

Фермент катализирует превращение субстрата в продукт красного цвета.

Добавьте стоп-раствор и измерьте интенсивность окраски.

Более высокая интенсивность в исследуемом образце подтверждает мишень-специфическую иммуномодулирующую активность BTE.

Чтобы начать оценку индуцированной BTE клеточно-опосредованной цитотоксичности с помощью анализа высвобождения LDH, сначала выделите секретируемые продукты трансгена, экс