Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:37 мин. • September 30th, 2026
Используйте супернатант культуры клеток млекопитающих, содержащий вирус гепатита C.
Выполните серийные разведения вирусной суспензии в ростовой среде.
Заинокулируйте каждый разведение на монослой клеток гепатомы и инкубируйте.
Вирус проникает в клетки, высвобождает свой геном и экспрессирует вирусные белки, включая неструктурный белок репликации.
Это приводит к образованию новых вирусных частиц, которые почкуются и инфицируют соседние клетки, формируя очаги инфицированных клеток.
После инкубации удалите среду и добавьте фиксатор. Инкубируйте при низкой температуре, чтобы зафиксировать клетки и пермеабилизировать мембрану.
Промойте клетки и добавьте блокирующий буфер для предотвращения неспецифического связывания антител.
Добавьте первичные антитела, которые связываются с неструктурным белком репликации.
Промойте для удаления несвязавшихся антител.
Затем добавьте конъюгированные с флуорофором вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.
Промойте еще раз, чтобы удалить несвязавшиеся антитела. Добавьте ДНК-связывающий краситель для окрашивания ядер.
Визуализируйте препарат с помощью флуоресцентного микроскопа и количественно определите число флуоресцентных фокусов для определ
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео