Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 4:29 мин. • September 30th, 2026
Используйте покровные стекла с клетками млекопитающих, предварительно обработанными аналогом уридина, при этом одна группа клеток должна быть инфицирована вирусом, а другая — остаться неинфицированной.
В зараженных вирусом клетках вирусные белки связываются с транскрипционным аппаратом хозяина и подавляют синтез РНК клетки-хозяина, тогда как в незараженных клетках синтез РНК продолжается беспрепятственно.
Промойте буфером. Добавьте параформальдегид для фиксации клеток, затем промойте. Добавьте детергент для пермеабилизации клеточных мембран, затем промойте.
Перенесите покровные стекла в увлажненную камеру.
Добавьте раствор для клик-окрашивания, содержащий флуоресцентный азид, катализатор и восстановитель, затем инкубируйте в темноте.
Восстанавливающий агент активирует катализатор, который позволяет флуоресцентному азиду связываться с новосинтезированной РНК, меченной уридином.
Промойте покровные стекла в буфере, опустите их в воду и удалите излишки влаги.
Используя антифейдинговый среду для заключения, закрепите покровные стекла на предметном стекле и высушите на воздухе.
При наблюдении под инвертиционным флуоресцентным микроскопом снижение интенсивности сигнала в инфицированных клетках по
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео