Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:35 мин. • September 30th, 2026
Возьмите культуры клеток млекопитающих. Инфицируйте опытную культуру вирусом, оставив контрольную неинфицированной.
Дайте вирусу адсорбироваться, затем замените среду.
Вирус проникает в клетку и высвобождает свой геном. Вирус экспрессирует белок вирулентности, который дестабилизирует комплексы факторов транскрипции хозяина и подавляет транскрипцию клетки-хозяина.
Контрольные же клетки сохраняют активную транскрипцию.
Добавьте аналог нуклеозида, который встраивается в синтезируемые РНК.
Соберите промытые клетки.
Зафиксируйте клетки для сохранения их структуры. Центрифугируйте клетки и промойте их буфером.
Добавьте детергент для пермеабилизации клеток, затем промойте их.
Добавьте химически модифицированный флуоресцентный краситель, который реагирует с аналогом нуклеозида для маркировки синтезируемых РНК, после чего выполните промывку.
Выполните иммуноокрашивание для флуоресцентного мечения вирусных антигенов, чтобы идентифицировать инфицированные клетки.
Используйте проточную цитометрию для детектирования флуоресценции РНК хозяина и вирусного антигена.
Сравните интенсивность флуоресценции РНК в контрольной и опытной популяциях. Смещение сигнала в опытной популяции в сторону уменьшения, указываю
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео