Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:36 мин. • September 30th, 2026
Начните с культуры эпителиальных клеток почек человека, выращенных в богатой питательными веществами среде.
Замените среду на среду с пониженным содержанием сыворотки, чтобы минимизировать влияние сыворотки и повысить эффективность трансфекции.
Покапельно добавьте смесь для трансфекции к клеткам.
Смесь содержит ретровирусную ДНК-конструкцию с целевым геном, упаковочную плазмиду, обеспечивающую синтез необходимых вирусных белков, и полиэтиленимин, который образует комплексы с плазмидной ДНК для облегчения трансфекции.
Инкубируйте клетки для обеспечения поглощения комплекса ДНК.
Замените среду, чтобы удалить остатки реагентов для трансфекции.
Внутри клетки плазмидная ДНК проникает в ядро, где она направляет синтез вирусных белков и вирусной РНК, несущей целевой ген.
Эти компоненты собираются и почкуются в среду в виде рекомбинантных ретровирусных частиц.
Соберите среду, содержащую вирус, и на короткое время поместите ее при низкой температуре для поддержания стабильности вируса.
Центрифугируйте для осаждения клеточного дебриса.
Разделите супернатант вируса на аликвоты, быстро заморозьте в жидком азоте и храните при низкой температуре для последующих экспериментов по переносу генов.
В чашку Петр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео