Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:44 мин. • September 30th, 2026
Начните со смеси плазмид, содержащей вспомогательные плазмиды, кодирующие белки репликации и транскрипции RSV, и отдельную плазмиду, несущую полноразмерную кДНК антигенома RSV, экспрессирующую GFP.
Каждая плазмида находится под контролем промотора T7.
Добавьте реагент для трансфекции на основе липосом и инкубируйте для обеспечения формирования комплексов.
Введите эти комплексы в генетически модифицированные клетки почек хомяка, экспрессирующие Т7 РНК-полимеразу, и инкубируйте.
Плазмидные комплексы проникают в клетки, где РНК-полимераза T7 транскрибирует плазмиды RSV.
Это приводит к синтезу вирусных мРНК, кодирующих белки репликации и транскрипции, и к образованию антигеномной РНК RSV положительной полярности.
Используя механизмы хозяина, эти мРНК синтезируют белки репликации и транскрипции вируса, которые формируют функциональный полимеразный комплекс RSV.
Затем полимеразный комплекс RSV превращает РНК положительной полярности в геномную вирусную РНК.
Эта геномная РНК направляет синтез вирусных мРНК, которые кодируют структурные белки и GFP.
Под флуоресцентным микроскопом зеленая флуоресценция подтверждает экспрессию вирусных генов и начало продукции рекомбинантного RSV.
За день до трансфекц
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео