Метод определения титра вируса по количеству бляшек для количественной оценки инфекционного респираторно-синцитиального вируса

Приготовьте серийные разведения суспензии респираторно-синцитиального вируса (RSV).

Внесите каждый разведение в отдельные лунки многолуночного планшета с нанесенными в них чувствительными к RSV клетками млекопитающих.

Инкубируйте для того, чтобы вирус мог связаться с рецепторами на поверхности клеток, обеспечить слияние мембран и высвободить свой геном в цитоплазму.

Затем нанесите полужидкую среду для создания наслоения, чтобы ограничить диффузию вируса, и инкубируйте.

Инфицированные клетки экспрессируют вирусный белок слияния, который опосредует слияние клеток, в результате чего образуются многоядерные структуры, называемые синцитиями.

По мере прогрессирования репликации вируса эти синцитии дегенерируют, образуя прозрачные зоны, известные как бляшки.

Осторожно встряхните планшет, чтобы удалить полутвердый слой, и промойте клетки для удаления остатков клеточного детрита.

Нанесите краситель для окрашивания жизнеспособных клеток, при этом бляшки должны остаться неокрашенными.

Удалите краситель, проведите деконтаминацию планшета в растворе гипохлорита натрия и промойте водой.

Дайте планшету высохнуть на воздухе.

Выберите лунки с четко выраженными бляшками и подсчитайте их для определения вирусн