Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:35 мин. • September 30th, 2026
Возьмите супернатанты культур, содержащие дочерние вирионы, высвобожденные из клеток-хозяев, инфицированных либо исследуемым вариантом HIV-1, либо контрольным вирусом дикого типа.
Тестовый вирус несет вариант гена, который изменяет эффективность репликации и влияет на продукцию дочерних вирионов.
Добавьте супернатанты в смесь для обратной транскрипции, содержащую радиоактивно меченный нуклеотид, немеченный нуклеотид, РНК-матрицу, праймер, кофакторы, детергент и стабилизаторы.
Проведите инкубацию для обеспечения формирования комплекса матрица-праймер, в то время как детергент лизирует вирионы, высвобождая обратную транскриптазу (RT).
РТ синтезирует ДНК на основе комплекса матрица–праймер, включая в нее радиоактивно меченый нуклеотид.
Перенесите образцы на мембрану, связывающую нуклеиновые кислоты, и высушите на воздухе для иммобилизации радиоактивно меченой ДНК.
Неоднократно промывайте буфером и этанолом при перемешивании, чтобы удалить несвязанные компоненты.
Высушите мембрану на воздухе и оберните ее. Экспонируйте ее на радиочувствительном экране и зарегистрируйте сигналы с помощью фосфоримаджера.
Снижение сигнала в исследуемом образце указывает на более низкий уровень RT, что отражает ум
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео