Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:31 мин. • September 30th, 2026
Начните с многолуночного планшета, содержащего эпителиальные клетки, инфицированные генетически модифицированным вирусом.
Вирус несет трансген, кодирующий фермент люциферазу.
Возьмите свежие культуры эпителиальных клеток в многолуночном планшете с белыми стенками.
Перенесите супернатант с неизвестными концентрациями вируса в лунки белого цвета.
Одновременно добавьте известные концентрации вируса в качестве стандартов.
Центрифугируйте планшет, чтобы обеспечить тесный контакт между вирусными частицами и рецепторами на поверхности клеток-хозяев, и инкубируйте.
Вирус проникает в клетку-хозяина и доставляет свой геном в виде одноцепочечной РНК отрицательной полярности.
Затем вирусная РНК-полимераза транскрибирует геном в мРНК.
С использованием клеточного аппарата хозяина мРНК транслируется в вирусные белки, включая люциферазу.
Количество люциферазы, накопившейся внутри клетки-хозяина, увеличивается с ростом концентрации вируса.
Образцы готовы к дальнейшему определению концентрации вируса с помощью анализа люциферазы.
Подготовьте стандартную кривую VSV-Delta-51 в безсывороточной среде DMEM таким образом, чтобы конечная концентрация бляшкообразующих единиц на миллилитр после переноса на клетки Vero
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео