Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:53 мин. • September 30th, 2026
Начните с эпителиальных клеток, инфицированных вирусом вакцинии и трансфицированных рекомбинантным плазмидным вектором.
Вектор содержит целевой ген с зелельным флуоресцентным маркером и ген метаболического селективного отбора с красным флуоресцентным маркером под контролем вирусного промотора.
В процессе репликации вирусной ДНК плазмидная кассета встраивается в вирусный геном.
Соберите клетки в безсывороточной среде.
Для лизиса клеток и высвобождения вирусов используйте циклы замораживания-оттаивания.
Подготовьте серийные разведения лизата.
Заразите свежие эпителиальные клетки разведенным лизатом для получения отдельных изолированных бляшек.
Добавьте среду, содержащую сыворотку для выживания клеток, и реагент для метаболического отбора, затем инкубируйте.
Селективный реагент ингибирует ферменты, участвующие в синтезе нуклеотидов. Только инфицированные клетки, несущие ген метаболической селекции, экспрессируют альтернативный фермент, который обеспечивает синтез нуклеотидов и позволяет клеткам выживать.
Удалите среду и проведите наблюдение под флуоресцентным микроскопом.
Наличие как красной, так и зеленой флуоресценции в бляшке свидетельствует об успешной интеграции кассеты и экспрессии целево
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео