Интраназальное инфицирование мышей герпесвирусом мышей для оценки иммунного ответа хозяина

Начните с использования здоровой анестезированной мыши, расположенной в положении для респираторного введения.

Введите мышиный герпесвирус интраназально для инициации инфекции.

Вирус перемещается по дыхательным путям и достигает легких.

В легких вирус инфицирует эпителиальные клетки легких и высвобождает свой нуклеокапсид.

Вирусный геном проникает в ядро и транскрибируется в вирусную РНК.

Цитозольный сенсор хозяина распознает вирусную РНК и инициирует сигнальные пути, которые активируют специфические факторы транскрипции. Эти факторы затем стимулируют экспрессию генов цитокинов, что приводит к выработке противовирусных цитокинов.

После инфицирования проведите вскрытие эвтаназированной мыши и извлеките ткани легких.

Поместите одну долю легкого в пробирку с силикатными шариками и добавьте охлажденную культуральную среду.

Гомогенизируйте ткань для разрушения клеток и высвобождения внутриклеточных компонентов, включая антивирусные цитокины.

Охладите гомогенат на льду, затем повторите гомогенизацию, чтобы обеспечить полное разрушение ткани.

Центрифугируйте для осаждения клеточного дебриса.

Соберите супернатант, содержащий противовирусные цитокины, для оценки иммунного ответа организма на инфекцию