Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:41 мин. • September 30th, 2026
Возьмите пробирку, содержащую стартовую культуру модифицированных клеток E. coli, несущих ген T7-полимеразы под контролем lac-оператора вместе с экспрессионной плазмидой.
Плазмида содержит ген, кодирующий белок оболочки, производный от бактериофага Qβ.
Этот ген регулируется T7-промотором и lac-оператором.
Перенесите культуру в колбу со средой.
Инкубируйте при перемешивании для стимулирования роста бактерий.
Добавьте синтетический аналог аллолактозы, который инактивирует репрессор lac, инициируя экспрессию Т7-полимеразы.
Затем Т7-полимераза связывается с промотором T7 на плазмиде и транскрибирует ген белка оболочки, который затем транслируется с образованием белка оболочки.
Эти белки оболочки самособираются в вирусоподобные частицы (ВЛЧ), которые образуют неинфекционные каркасы.
Перенесите культуру в центрифужные стаканы.
Центрифугируйте для осаждения клеток.
Удалите супернатант и перенесите осадок в пробирку.
Осадок клеток, содержащий внутриклеточные VLP, готов к очистке.
Перед началом процедуры экспрессии бактериофага Q-бета протрите рабочую поверхность раствором гипохлорита натрия и этанола в соотношении 1:1. В асептических условиях приготовьте две стартовые культуры объемом 3 мл, добавив от
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео