Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:36 мин. • September 30th, 2026
Для начала используйте рекомбинантно экспрессированный, не содержащий РНК комплекс нуклеопротеина и фосфопротеина, специфичный для данного вируса.
Инкубируйте комплекс с вирус-специфичными РНК-олигонуклеотидами для инициации сборки нуклеокапсидоподобных частиц.
В процессе сборки вирусная РНК вытесняет фрагмент фосфопротеина, что позволяет нуклеопротеину обволакивать РНК, формируя частицы, подобные нуклеокапсидам.
Центрифугируйте образец, чтобы удалить осадок.
Возьмите предварительно уравновешенную колонку для эксклюзионной хроматографии, заполненную пористой смолой, и нанесите на нее супернатант.
По мере прохождения образца через колонку крупные комплексы нуклеокапсида исключаются из пор и элюируются первыми.
Белковые комплексы среднего размера и малые молекулы РНК проникают в поры и элюируются позже.
Следите за абсорбцией элюата для построения профиля элюции с четко выраженными пиками.
Первый пик соответствует собранным нуклеокапсидам, за которыми следуют более мелкие белковые комплексы и свободная РНК.
Соберите фракцию, соответствующую пику нуклеокапсида, для валидации и дальнейшего анализа.
Для сборки специфических вирусных нуклеокапсидов смешайте очищенный комплекс N0P с олигонуклеотидам
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео