Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:37 мин. • September 30th, 2026
Начните с многолуночного планшета, содержащего эпителиальные клетки, инфицированные вирусом Зика, который является одноцепочечным РНК-вирусом.
В процессе инфекции вирус высвобождает РНК, которая образует двухцепочечный интермедиат РНК или dsRNA.
Для обнаружения этих интермедиатов dsRNA замените среду метанолом, чтобы пермеабилизировать клетки и сохранить их целостность.
Удалите метанол и промойте буфером.
Добавьте блокирующий раствор для предотвращения неспецифического связывания антител.
Добавьте первичные антитела, специфичные к вирусной dsRNA.
Инкубируйте при низкой температуре с осторожным покачиванием, чтобы обеспечить связывание первичных антител с вирусной dsRNA.
Промойте буфером, добавьте вторичные антитела, конъюгированные с красным флуорофором, и инкубируйте.
Вторичные антитела связываются с первичными антителами.
Промойте буфером, затем добавьте флуоресцентный ДНК-связывающий краситель для окрашивания ядра.
Проведите наблюдение под флуоресцентным микроскопом для визуализации меченого вирусного промежуточного продукта dsRNA внутри инфицированной клетки.
Для проведения иммуноцитохимического анализа удалите среду из лунок 12-луночного планшета и добавьте в каждую лунку один миллилитр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео