Оценка системы жидкого оверлея для проведения метода бляшек при определении титра вируса

Возьмите многолуночный планшет с монослоями эпителиальных клеток и добавьте в лунки вирусную суспензию.

Инкубируйте с периодическим покачиванием для равномерного распределения вирусов. Вирусы прикрепляются к клеткам и проникают в них.

В одну лунку добавьте расплавленный агароз, который затвердевает, образуя полужидкий слой.

В другую лунку добавьте вязкий жидкий слой на основе микрокристаллической целлюлозы и инкубируйте. Его вязкость ограничивает диффузию вируса, аналогично полутвердому слою.

Внутри клетки вирус высвобождает свой геном и синтезирует новые вирусные РНК и белки.

Новые вирусы собираются, выходят из клеток и вызывают лизис клеток.

Высвобожденные вирусы инфицируют соседние клетки, образуя бляшки.

Отоснимите жидкий верхний слой и добавьте фиксатор для сохранения нелизированных клеток.

Слейте фиксатор и удалите агарозный слой.

Добавьте краситель, который окрашивает живые клетки, оставляя бляшки неокрашенными. Затем удалите излишки красителя путем промывки.

Жидкий оверлей дает сопоставимое количество бляшек с полутвердым оверлеем, что подтверждает возможность его использования в качестве альтернативы в методах анализа бляшек.

На следующий день после посева используйте инвертированный