Извлечение интактной почки у мыши: метод получения почки без почечной капсулы у мышиных моделей

У грызунов почка имеет защитную волокнистую внешнюю оболочку, называемую почечной капсулой, и слой перинефриального жира над ней. Чтобы извлечь мышиную почку без окружающих слоев, начните с размещения усыпленной мыши в лежачем положении на хирургической кровати.

Надрезайте кожу живота и мышечные слои. Продолжайте делать продольные разрезы до тех пор, пока брюшная полость не обнажится. Затем найдите кишечник и слегка приподнимите его. Разрежьте под кишечником и удалите его из тела мыши, чтобы обнажить почки.

Далее найдите мочеточник и разрежьте нижележащие соединительные ткани так, чтобы почки отделились от брюшной полости. Иссекайте обе почки по отдельности. Поместите извлеченную почку в чашку, содержащую ледяной буфер, и осмотрите ее под микроскопом.

Теперь удалите промежностный жир из почки, чтобы визуализировать почечную лоханку, воронкообразную расширенную часть мочеточника. Отрежьте часть почечной лоханки от основания, чтобы удалить остатки мочеточника.

Наконец, проколите наружную фиброзную почечную капсулу поверхностно. Используя созданное отверстие, аккуратно отслаиваются вся почечная капсула от поверхности почки. Это помогает удалить надпочечник – эндокринную железу, прикрепленную к почечной капсуле – и получить неповрежденную почку.

С помощью щипцов для внутренних тканей и ножниц для внутренней диссекции защемите кишечник и приподнимите его в сторону от брюшной стенки. Одновременно разрежьте нижнюю часть кишечника в проксимальном отделе двенадцатиперстной кишки и дистальном отделе толстой кишки, чтобы получить доступ к забрюшинному пространству, содержащему почки.

Аккуратно зажмите и приподнимите дистальный конец мочеточника тканевыми щипцами. С помощью ножниц для препарирования разрежьте под защемленным мочеточником по направлению к почке до тех пор, пока он не освободится от окружающей соединительной ткани. Как только почки обнажаются, извлеките их по отдельности.

Наполните посуду, покрытую силиконовым эластомером, ледяным раствором KRB. Переложите почку в чашку для вскрытия и убедитесь, что она полностью погружена в воду. С помощью ножниц с тонкими пружинами и внутренних щипцов удалите жировую ткань из основания почки, чтобы обнажить дистальный отдел почечной лоханки или РП и проксимальный отдел мочеточника.

Удалите проксимальный отдел мочеточника и часть дистального отдела РП от основания с помощью ножниц и щипцов с тонкими пружинами. Проткните наружную почечную капсулу щипцами с тонким кончиком, отклоняя кончики от тела почки. С помощью щипцов каждой рукой зажмите свободные концы капсулы и раздвиньте их до тех пор, пока оставшаяся мембрана почечной капсулы не будет полностью удалена.