Вибратомное секционирование всей мышиной почки: метод создания тонких участков мышиной почки

Чтобы подготовить тонкие срезы мышиной почки, сначала приобретите свежесобранную мышиную почку. Переложите почку на фильтровальную бумагу и высушите ее, чтобы обеспечить оптимальное сцепление с вибратомным держателем образца.

Затем установите почку мочеточниковой стороной вниз, используя тонкий слой цианоакрилатного клея, нанесенного на основание держателя образца вибратома, закрепив почку в вертикальном положении. Переложите держатель образцов на буферный лоток.

Наполните лоток подходящим буфером, чтобы полностью погрузить верхнюю поверхность почки. Поднос окружен ледяной баней, чтобы предотвратить повреждение тканей из-за накопления тепла во время нарезки. Установите вибратомное лезвие под соответствующим углом, скоростью и амплитудой. Отрегулируйте параметр толщины, чтобы получить участки ткани нужной толщины.

Во время работы лезвие вибрирует в боковом направлении и продвигается вперед, проникая через тканевый образец. Вибрационное лезвие позволяет выполнять секционирование с меньшим давлением и сводит к минимуму деформацию ткани, создавая однородные участки ткани почки, представляющие интерес, сохраняя при этом морфологию ткани.

Тем временем соберите многолуночный планшет, содержащий подходящий охлажденный буферный раствор, чтобы имитировать физиологические условия ткани. Теперь перенесите нарезанные участки ткани в буфер. Наконец, храните срезы тканей при низкой температуре до дальнейшего анализа.

С помощью тупых щипцов аккуратно захватите и извлеките подготовленную почку из ледяного раствора KRB. Немедленно поместите почку на впитывающую бумагу примерно на 2-4 секунды, чтобы удалить лишнюю внешнюю влагу. Аккуратно прокатайте почку по абсорбирующей бумаге, чтобы убедиться, что все стороны паренхимы высохли, чтобы обеспечить оптимальное сцепление почки со стадией вибратомии.

Немедленно нанесите тонкий слой цианоакрилатного клея на основание пластины для образца вибратома и с помощью тупых щипцов поместите почку мочеточниковой стороной вниз на область, покрытую клеем. Аккуратно надавите вниз на верхнюю часть почки плоским краем щипцов примерно на 10-20 секунд, чтобы клей высох.

Плотно закрепите планшет для образцов на дне буферного лотка и отрегулируйте уровень раствора KRB так, чтобы верхняя часть почки была полностью погружена. Для автоматического секционирования вибратома выберите начальное и конечное положения цикла резки вибратомного лезвия на расстоянии от 0,5 до 1 сантиметра от почки, чтобы убедиться, что вся плоскость почек рассекается.

Запустите процесс автоматической резки, убедившись, что лезвие соприкасается с почкой. С помощью щипцов собирают срезы, которые освобождаются от почки и сразу же переносят их в отдельные лунки.