Ксенотрансплантат опухоли, полученный от пациента: метод создания экспериментальной мышиной модели для оценки уротелиально-клеточной карциномы

Для создания уротелиально-клеточной карциномы, полученной от пациента, или создания модели мыши с ослабленным иммунитетом мыши инокулируют человеческими клетками UCC для изучения прогрессирования рака и метастазирования.

Чтобы начать ксенотрансплантат, возьмите иммунокомпрометированную самку мыши, находящуюся под наркозом. Сбрейте нижнюю часть задней части мыши, чтобы обнажить ее тазовую область. Теперь поместите мышь в положение лежа на спине так, чтобы ее открытая кожа соприкасалась с дисперсионной прокладкой, которая служит заземляющим электродом для завершения цепи во время электрической стимуляции.

Далее возьмите ангиокатетер, тонкую полую трубку, прикрепленную к направляющей проволоке. Смажьте поверхность катетера и вставьте его в уретру мыши, чтобы получить доступ к ее мочевому пузырю. Поместите активный электрод на направляющую проволоку для стимуляции стенки мочевого пузыря. Эта процедура способствует разрыву мукополисахаридного слоя, защитного барьера слизистой оболочки мочевого пузыря, и способствует последующему приживлению опухолевых клеток.

Теперь аккуратно извлеките узел ангиокатетера-проводника из уретры. Возьмите второй ангиокатетер, прикрепленный к шприцу, содержащему суспензию клеток UCC, и вставьте его в мочеиспускательный канал мыши. Введите клетки UCC в мочевой пузырь мыши. Раковые клетки взаимодействуют со слизистой оболочкой мочевого пузыря, образуя опухоль, которая в конечном итоге может распространиться на другие ткани и органы.

Чтобы подготовить животное к инъекции клеток UCC, используйте крем для удаления волос для бритья нижней части спины 6-8-недельной самки мыши NOD/SCID. Чтобы ввести клетки UCC в мочевой пузырь, сначала настройте монополярный электрокаутерный аппарат мощностью 4 Вт. После обезболивания мыши поместите ее в лежачее положение так, чтобы ее морда была в носовом конусе изофлурана, а голая спина была твердо закреплена на дисперсионном электроде.

Смажьте ангиокатетер 24-го калибра смазывающим желе, а затем осторожно, но плотно введите ангиокатетер через уретру мыши. Если катетер изгибается при входе, вставьте направляющую проволоку наполовину в катетер, чтобы обеспечить стабильность. Затем полностью вставьте прямой проводник с фиксированным сердечником 0,64 миллиметра на 1 миллиметр за конец ангиокатетера.

Удерживайте монополярный штифт на направляющем проводе в течение 1 секунды, допуская электрическое раздражение слизистой оболочки мочевого пузыря. Прикрепите свежий стерильный ангиокатетер к шприцу Люэра-Лока объемом 1 миллилитр и наберите до 200 микролитров клеток UCC. Извлеките направляющую проволоку и ангиокатетер из мочеиспускательного канала, а затем введите ангиокатетер с прикрепленным к нему шприцем клеток.

Введите 50 микролитров клеток в мочевой пузырь мыши, и, чтобы позволить клеткам прилипнуть к стенке мочевого пузыря, подождите несколько секунд, прежде чем удалять ангиокатетер. Наконец, извлеките мышь из изофлуранового носового конуса и заземляющей подушки и наблюдайте за ней в течение 1 часа после процедуры на предмет признаков дистресса.