Окрашивание внеклеточной ДНК: метод идентификации внеклеточной ДНК в срезах ткани FFPE

Умирающая клетка высвобождает часть ДНК за пределами клетки, называемую внеклеточной ДНК. Чтобы окрасить внеклеточную ДНК, начните со взятия фиксированного формалином парафина, или FFPE, среза ткани на предметном стекле. Нагрейте предметное стекло в течение желаемого времени. Это облегчает прикрепление ткани к поверхности предметного стекла и размягчает окружающий парафин.

Погрузите предметное стекло в жидкость для депарафинизации, чтобы полностью растворить слой парафина вокруг ткани. Затем окуните предметное стекло в уменьшающуюся концентрацию этанола, чтобы регидратировать депарафинизированную ткань. После регидратации погрузите предметное стекло в кипящий раствор для извлечения антигена. Эта процедура обнажает эпитопы, которые были изменены в процессе фиксации.

Наложите на предметное стекло первичные антитела и позвольте им связываться со специфическими незамаскированными эпитопами, присутствующими на клетке. Затем добавьте флуоресцентно помеченные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами. Окуните предметное стекло в раствор Sudan Black для уменьшения автофлуоресценции фона.

Наконец, нанесите каплю монтажного материала, дополненного DAPI, на участок ткани