Амфотерицин-В, опосредованный перфорированным патч-зажимом: электрофизиологический метод изучения ионных токов в клетках мочевого пузыря

Метод перфорированного патч-зажима позволяет в режиме реального времени измерять ионные токи, связанные с активностью ионных каналов на клетках, таких как гладкие мышцы детрузора или DSM, клетки мочевого пузыря.

Для начала загрузите суспензию клеток DSM в стеклянную камеру и инкубируйте для обеспечения адгезии клеток. Далее добавьте к прилипшим клеткам внеклеточный раствор, содержащий ионы тетраэтиламмония и цезия. Эти катионы блокируют калиевые каналы на клеточной мембране и ингибируют мешающие калийные токи.

Впоследствии возьмите полированную патч-хомутную пипетку – тонкую полую стеклянную трубку, содержащую записывающий электрод, подключенный к усилителю. Спереди заполните пипетку внутриклеточным раствором и обратно заполните ее тем же раствором, но содержащим амфотерицин-В, антибиотик, перфорирующий мембрану.

Теперь погрузите наконечник пипетки во внеклеточный раствор, содержащий клетки DSM. После установки потенциала и тока на соответствующие уровни переместите наконечник пипетки к клеточной мембране и одновременно контролируйте сопротивление электрода.

Быстрое увеличение значения сопротивления указывает на то, что наконечник пипетки достиг клеточной мембраны. Теперь приложите