Доставка ДНК-плазмид в уротелий мочевого пузыря мыши: процедура на основе электропорации для эффективной доставки ДНК-плазмид в уротелиальные клетки мышиного мочевого пузыря для создания генетически модифицированных моделей

Для начала подготовьте самку мыши, находящуюся под наркозом, в положении лежа на спине. Убедитесь, что его мочевой пузырь полностью пуст. Через отверстие уретры введите смазанный катетер. Смазка способствует гладкому прохождению уретры для входа в мочевой пузырь.

После катетеризации сделайте разрез в брюшной полости и рассеките внутреннюю мускулатуру, чтобы обнажить мочевой пузырь. Затем пипеткой нанесите суспензию плазмид ДНК, смешанную с подходящим красителем, в наружный конец катетера. Эти ДНК-плазмиды кодируют флуоресцентный репортерный ген.

Прикрепите шприц к катетеру и надавите на него, чтобы ввести плазмидный раствор в мочевой пузырь. Введенные молекулы красителя окрашивают мочевой пузырь, подтверждая успешное введение плазмидного раствора. Снимите катетерный узел и затяните наружное отверстие уретры, чтобы предотвратить вытекание плазмидного раствора.

Теперь зажмите мочевой пузырь с помощью двух электродов, подключенных к электропорационному генератору. Подайте на мочевой пузырь электрические импульсы соответствующего напряжения в течение нужного периода времени. Воздействие электрических полей на уротелий мочевого пузыря, самую внутреннюю оболочку мочевого пузыря, приводит