Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:11 мин. • April 30th, 2023
Экзосомы – наноразмерные, связанные с мембраной везикулы, несущие функциональные биомолекулы – активно секретируются большинством типов клеток и могут быть выделены из супернатантов клеточных культур in vitro. Чтобы выделить экзосомы, сначала собирают надосадочную жидкость или кондиционированные среды из представляющей интерес клеточной культуры. Кондиционированная среда будет содержать экзосомы, белки, клеточный мусор и везикулы.
Центрифугируйте среду для гранулирования клеточного мусора. Соберите содержащую экзосому надосадочную жидкость и отфильтруйте ее через клеточные фильтры, чтобы удалить более крупные везикулы. Переложите определенный объем отфильтрованной среды в свежую пробирку. Далее смешайте соответствующие концентрации сахарозы и оксида дейтерия, чтобы получить подушку из сахарозы - прерывистый градиент сахарозы.
Добавьте определенный объем раствора сахарозы в пробирку, содержащую среду, раствор образует отдельный слой на дне. Теперь центрифугируйте пробирку на высокой скорости. Подушка сахарозы облегчает миграцию экзосом из среды в раствор сахарозы, сохраняя при этом целостность экзосом. Белковые загрязнители высокой плотности занимают границу раздела между раствором
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео