Инкапсуляция миРНК в экзосомы с помощью электропорации: метод загрузки миРНК в экзосомы на основе электрических импульсов

Экзосомы - наноразмерные мембранные везикулы клеточного происхождения - демонстрируют потенциал в качестве терапевтических средств доставки двухцепочечной малой интерферирующей РНК или миРНК.

После высвобождения в цитоплазму клетки-мишени миРНК связывается с индуцированным РНК комплексом сайленсинга. Затем активированный комплекс распознает и связывается со специфической мРНК, отрицательно регулируя ее экспрессию и опосредуя сайленсинг генов.

Чтобы инкапсулировать миРНК в экзосомы, сначала охладите электропорационную кювету на льду. Затем смешайте экзосомы и специфические миРНК в пробирке в нужном соотношении, используя подходящий буфер для электропорации. Теперь переложите эту смесь в предварительно охлажденный кювет.

Закройте кювету и поместите ее в держатель кюветы электропоратора. Вращайте вращающееся колесо, чтобы убедиться, что кювета соприкасается с электродами электропорации. Теперь запустите выбранную программу электропорации.

Во время электропорации электрические импульсы нарушают фосфолипидный бислой экзосом, взвешенных в проводящем буфере. Это приводит к образованию переходных пор в мембране экзосомы, способствуя диффузии миРНК в везикулу. Буфер помогает предотвратить агрегацию миРНК.

Как только электропорация завершена, поры снова запечатываются, захватывая миРНК внутри. Наконец, извлеките кювету из электропоратора и переложите смесь в свежую пробирку. Храните инкапсулированные миРНК экзосомы при низких температурах до дальнейшего использования.

Перед началом электропорации предварительно охладите электропораторную кювету на льду в течение 30 минут. Смешайте 7 микрограммов экзосом с 0,33 микрограмма миРНК в микроцентрифужной пробирке. Добавьте буфер лимонной кислоты, чтобы добиться объема 150 микролитров. Добавьте смесь экзосом-миРНК в кювету для электропорации с помощью пластиковой пипетки и закройте кювету крышкой.

Поместите кювету в нужной ориентации в держатель кюветы электропоратора и поверните вращающееся колесо электропоратора на 180 градусов по часовой стрелке. Выберите нужную программу и нажмите кнопку «Пуск», чтобы начать электропорацию. Дисплей укажет на успешный пульс.

Затем поверните колесо назад на 180 градусов против часовой стрелки и снимите кювету. С помощью пластиковой пипетки извлеките образец из кюветы в новую микроцентрифужную пробирку. Храните тюбик на льду или в холодильнике перед дальнейшей обработкой, если он не используется сразу.