Выделение почечных клеток мыши: метод выделения и получения первичной культуры эпителиальных клеток почечных канальцев

Чтобы выделить эпителиальные клетки почечных канальцев или ПЭС, начните с взятия только что выделенной почки мыши в чашке Петри. Отделите почечную капсулу - тонкий внешний слой, окружающий почку, - и удалите мозговое вещество или самую внутреннюю часть почки, оставив кору, содержащую канальцы и эпителиальные клетки канальцев.

Оставшиеся части почек измельчите на мелкие кусочки и инкубируйте их в теплом буфере для пищеварения, содержащем фермент коллагеназу. Коллагеназа расщепляет коллагеновый белок, который удерживает почечные ткани вместе, высвобождая почечные канальцы и почечные клетки в суспензию.

Процедите суспензию, чтобы удалить непереваренные ткани почек. Далее добавьте в фильтрат предварительно охлажденные питательные среды. Более низкая температура нейтрализует коллагеназу и останавливает дальнейшее переваривание тканей. Центрифугируйте фильтрат на низкой скорости, чтобы позволить более плотным канальцам и трубчатым клеткам оседать, в то время как другие типы клеток и примеси остаются во взвешенном состоянии.

Удалите эту нежелательную фракцию надосадочной жидкости и добавьте питательную среду для ресуспендирования гранулы. Поместите суспензию в чашку для культуры, покрытую