Периодическое окрашивание кислотой по Шиффу или PAS: метод оценки структурных деформаций клубочков

Клубочковый клубок представляет собой сложную сеть капилляров в почке, которая фильтрует отходы и удаляет лишнюю жидкость из крови. Скорость почечной фильтрации зависит от этой специализированной структуры, которую можно исследовать с помощью периодической кислоты Schiff или окрашивания PAS.

Для начала возьмите парафинизированный срез коры головного мозга на предметном стекле. Обработайте предметное стекло ксилолом. Молекулы ксилола растворяют парафин из тканевого среза. Затем подвергните образец воздействию алкоголя в уменьшающейся концентрации. Спирт удаляет следы ксилола во время регидратации участка ткани для последующего связывания пятна.

Теперь периодически добавляйте в образец кислоту. Периодическая кислота превращает диолы, присутствующие в тканевых полисахаридах, такие как гликоген или муцин, в альдегиды. Эти альдегиды вступают в реакцию с реактивом Шиффа, комбинацией фуксина и серной кислоты, образуя краситель пурпурного цвета, который окрашивает участок ткани. Промойте предметное стекло, чтобы удалить излишки пятна.

После полоскания добавьте железо-гематоксилин, ядерное противопятно, которое связывается с ДНК и окрашивает ее в фиолетовый цвет. Постирайте, чтобы удалить лишнее пятно. Наконец, обезвоживайте образец с увеличивающейся концентрацией алкоголя, а затем добавляйте ксилол, который служит очищающим агентом. Этот шаг помогает улучшить контрастность участка ткани для микроскопического исследования.

Болезнь клубочков может быть визуализирована как утолщение базальной мембраны, измененные капилляры и аномальные клетки, которые связаны с нарушением функции почек.

Для детальной визуализации клубочковых клеток и мезангиального матрикса высушите неподвижные образцы коры почек, залитые парафином, при температуре 37 градусов Цельсия в течение 1 часа, после чего следует депарафинизация с последовательным погружением ксилола и нисходящего этанола. Регидратируйте образцы в дистиллированной воде в течение 5 минут и инкубируйте предметные стекла в растворе периодической кислоты в вытяжном шкафу.

Через 5 минут промойте предметные стекла тремя 5-минутными промывками в 100 миллилитрах дистиллированной воды с последующей 15-минутной инкубацией в реактиве Шиффа. По окончании инкубации вымойте предметные стекла в проточной воде из-под крана в течение 5 минут и запятнайте гематоксилином в течение 3 секунд, а затем тщательно промойте в проточной воде из-под крана еще на 15 минут.

Затем обезвожьте горки с помощью восходящих погружений на этанол и двух последовательных 3-минутных погружений в ксилол. После сушки на воздухе предметные стекла могут быть смонтированы с помощью монтажной среды на основе ксилола для оценки их клубочковой структуры на световом микроскопе с 400-кратным увеличением.

• Periodic Acid Schiff Stain - Method used to visualize glomerular cells and the mesangial matrix.
• PAS Stain Glomerulus - Specific application of PAS stain in kidney cortex study.
• Acid Schiff Staining - Another name for the PAS staining process.
• Periodic Acid Structure - Part of PAS stain, involved in revealing cellular structure in staining.
• Glomerular Tuft - Structure in kidney cortex, analyzed using PAS stain.

• Periodic Acid Schiff Stain - Define and contextualize (e.g., periodic acid schiff stain).
• Key Concepts - Summarize principles (e.g., staining theory).
• Underlying Mechanisms - Short description of PAS staining process.
• Connect to Experiment - Brief rationale linking periodic acid and schiff reagent to kidney cortex sample study.

• What is the Periodic Acid Schiff Stain method and how it contributes to kidney cortex research?
• How does the PAS staining process work?
• What is the role of the Glomerular Tuft in PAS staining?

• Describe Practical Applications - PAS stain used for analyzing kidney structures (e.g., medical diagnosis).
• Industry Impact - Benefits healthcare, particularly nephrology.
• Societal Importance - Enables better understanding of kidney diseases (e.g., education).
• Link to Scientific Advancements - Short description of innovations in staining techniques.