Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:18 мин. • April 30th, 2023
Клубочковый клубок представляет собой сложную сеть капилляров в почке, которая фильтрует отходы и удаляет лишнюю жидкость из крови. Скорость почечной фильтрации зависит от этой специализированной структуры, которую можно исследовать с помощью периодической кислоты Schiff или окрашивания PAS.
Для начала возьмите парафинизированный срез коры головного мозга на предметном стекле. Обработайте предметное стекло ксилолом. Молекулы ксилола растворяют парафин из тканевого среза. Затем подвергните образец воздействию алкоголя в уменьшающейся концентрации. Спирт удаляет следы ксилола во время регидратации участка ткани для последующего связывания пятна.
Теперь периодически добавляйте в образец кислоту. Периодическая кислота превращает диолы, присутствующие в тканевых полисахаридах, такие как гликоген или муцин, в альдегиды. Эти альдегиды вступают в реакцию с реактивом Шиффа, комбинацией фуксина и серной кислоты, образуя краситель пурпурного цвета, который окрашивает участок ткани. Промойте предметное стекло, чтобы удалить излишки пятна.
После полоскания добавьте железо-гематоксилин, ядерное противопятно, которое связывается с ДНК и окрашивает ее в фиолетовый цвет. Постирайте, чтобы удалить лишнее пятно. Наконец, обезвоживайте образец с увеличивающейся концентрацией алкоголя, а затем добавляйте ксилол, который служит очищающим агентом. Этот шаг помогает улучшить контрастность участка ткани для микроскопического исследования.
Болезнь клубочков может быть визуализирована как утолщение базальной мембраны, измененные капилляры и аномальные клетки, которые связаны с нарушением функции почек.
Для детальной визуализации клубочковых клеток и мезангиального матрикса высушите неподвижные образцы коры почек, залитые парафином, при температуре 37 градусов Цельсия в течение 1 часа, после чего следует депарафинизация с последовательным погружением ксилола и нисходящего этанола. Регидратируйте образцы в дистиллированной воде в течение 5 минут и инкубируйте предметные стекла в растворе периодической кислоты в вытяжном шкафу.
Через 5 минут промойте предметные стекла тремя 5-минутными промывками в 100 миллилитрах дистиллированной воды с последующей 15-минутной инкубацией в реактиве Шиффа. По окончании инкубации вымойте предметные стекла в проточной воде из-под крана в течение 5 минут и запятнайте гематоксилином в течение 3 секунд, а затем тщательно промойте в проточной воде из-под крана еще на 15 минут.
Затем обезвожьте горки с помощью восходящих погружений на этанол и двух последовательных 3-минутных погружений в ксилол. После сушки на воздухе предметные стекла могут быть смонтированы с помощью монтажной среды на основе ксилола для оценки их клубочковой структуры на световом микроскопе с 400-кратным увеличением.