Анализ экспрессии белков на основе массивов белков с обратной фазой: процедура одновременной количественной оценки экспрессии нескольких белков из клеточного лизата

Образец опухоли содержит гетерогенную популяцию белков. Используя лизат опухоли, несколько таких белков могут быть проанализированы параллельно, чтобы идентифицировать интересующий белок. Этот метод с высокой пропускной способностью называется Reverse Phase Protein Arrays или RPPA.

Для проведения РППА начинают с забора предметного стекла иммунологического анализа, покрытого нитроцеллюлозой. Обратите внимание на массив белков лизата опухоли на предметном стекле. Инкубируйте для захвата белка нитроцеллюлозой. Затем обработайте предметное стекло блокирующим буфером, который блокирует неспецифические сайты связывания антител на белках.

Удалите излишки блокирующего раствора. Теперь установите покрытое белком стекло в держатель и плотно закройте его. В результате на поверхности оползня образуются временные колодцы. Далее загрузите в лунки первичный раствор антитела. Эти антитела распознают эпитопы, присутствующие на соответствующей мишени, из смеси белков на матрице.

Наконец, добавьте флуоресцентно меченные вторичные антитела. Эти антитела присоединяются к предварительно связанным первичным антителам, образуя комплекс. Промойте предметное стекло, чтобы удалить все несвязанные вторичные а