Экспансионная патология: метод оптической визуализации клинических образцов тканей с высоким разрешением

Патология расширения, или ExPath, — это метод подготовки образцов биологических образцов, который позволяет с помощью обычной световой микроскопии получать изображения наноразмерных структур путем их расширения с помощью полимерной системы.

Сначала возьмите обработанное иммуноокрашенное предметное стекло и покройте его анкерным раствором, содержащим как белковые, так и полимер-реактивные группы. Белок-реактивная группа якорного реагента связывается с аминами биомолекул внутри клеток.

Затем добавьте подходящий желирующий раствор на образец и инкубируйте, чтобы обеспечить его диффузию внутри тканей. Полимерно-реакционноспособная группа закрепляющего реагента связывается со свободными мономерами в растворе желирования, позволяя биомолекулам прикрепляться к полимеру по мере его полимеризации.

Как только полимеризация образца будет завершена, накройте предметное стекло раствором протеиназы. Протеиназы переваривают цитоскелетные белки, чтобы устранить любую структурную резистентность, позволяя клеткам расширяться без разрыва. После ферментативного разложения желированный образец отделяется от предметного стекла и переходит в суспензию.

Теперь перенесите образец в подходящий буфер для про