Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:47 мин. • July 8th, 2025
Начните с посева иммортализованных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток, iHSPC, в средах, содержащих специфический стероидный гормон и гемопоэтический цитокин, регулирующих пролиферацию клеток в недифференцированном состоянии. Добавьте подходящий катионный полимер и лентивирусные векторы.
Рекомбинантные вирусы несут кодирующие последовательности для коротких шпилечных РНК, шРНК, направленные на определенный ген хозяина и ген маркера устойчивости к антибиотикам.
Центрифуга для осаждения клеток и вирусов. Во время инкубации катионные полимеры нейтрализуют заряды клеточных мембран, усиливая связывание вирусов. После слияния мембран вирусный генетический материал и ферменты высвобождаются в клеточную цитоплазму. Вирусный геном подвергается обратной транскрипции, перемещается в ядро и интегрируется в геном хозяина.
Под влиянием специфического промотора в конструкции конструкция гена shRNA, содержащая соответствующую мРНК-мишеню последовательность, петлевый сегмент и другую последовательность, комплементарную первой, транскрибируется с образованием шРНК с петлевым сегментом неспаренных нуклеотидов. После транскрипции шРНК экспортируется в цитоплазму.
Специфическая рибонуклеаз
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео