Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:21 мин. • July 8th, 2025
Интегразаза phiC31 представляет собой фермент рекомбиназы, полученный из фагов и катализирующий сайт-специфическую рекомбинацию трансгена, чужеродного гена, в геном хозяина. Для интеграции трансгена в организме хозяина Anopheles начните с эмбриона Anopheles в подходящем буфере.
Геном Anopheles предварительно сконструирован с сайтом прикрепления для интеграции генов и голубым флуоресцентным маркером для визуального отбора. Затем добавьте во флакон небольшой объем донорской плазмиды, несущей желаемый трансгенный груз, место прикрепления, красный флуоресцентный маркер и компоненты плазмидного каркаса. Затем добавьте оптимальный объем вспомогательной плазмиды, несущей ген-кодирующую интегразу. Теперь загрузите плазмидную смесь в микрошприц.
Осторожно введите плазмиды в задний полюс эмбриона, место происхождения половых клеток, что приведет к небольшому движению цитоплазмы. Оказавшись внутри эмбриона, плазмида-помощник начинает синтезировать ферменты интегразы.
Фермент интегразы опосредует сайт-специфическую рекомбинацию между донорской плазмидой и геномом хозяина. Таким образом, трансген и красный флуоресцентный маркер из донорской плазмиды интегрируются в рекомбинантные сайты прикрепл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео