Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:34 мин. • July 8th, 2025
Для обратной трансфекции малых интерферирующих РНК, или миРНК, класса двухцепочечных РНК, в неадгезивные адипоциты или жировые клетки, готовят суспензию миРНК, нацеленную на специфический ген, кодирующий белки в адипоцитах. Добавьте подходящий реагент для трансфекции на основе катионных липидов. Инкубируйте смесь для образования трансфекционных комплексов путем электростатических взаимодействий.
Переложите смесь в покрытые коллагеном лунки многолуночной пластины. Трансфекционные комплексы иммобилизуются на покрытии пластины за счет неспецифических взаимодействий. Пипеткой введите суспензию адипоцитов в лунки, содержащие иммобилизованные трансфекционные комплексы. Адипоциты неплотно прилипают к покрытию пластины, увеличивая физический контакт между клетками и комплексами.
Трансфекционный комплекс сливается с клеточной мембраной и доставляет миРНК в цитоплазму. МиРНК, содержащая антисмысловую цепь с комплементарной последовательностью для целевой мРНК и сенсорную цепь, распознается мультибелковым РНК-индуцирующим сайленсингирующим комплексом, или RISC. МиРНК связывается с RISC, и нити отделяются, при этом антисмысловая цепь остается связанной с комплексом.
Активированный комплекс миР
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео